Annexin Ⅴ-FITC/PI Kit / 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

相關(guān)介紹

   細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面，這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸（PS）從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外，使PS 暴露在細(xì)胞膜外表面。PS 是一種帶負(fù)電荷的磷脂，正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面，在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對(duì)稱性被破壞而使PS 暴露在細(xì)胞膜外。Annexin V 具有易于結(jié)合到磷脂類如PS 的特性，對(duì)PS 有高度的親和性。因此，該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測(cè)暴露在細(xì)胞膜表面的PS。PS 轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所*的，也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的，而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就破壞了。因此，可以采用Annexin V 與PI 雙染的方法，通過(guò)流式檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡。

儲(chǔ)存條件2-8℃避光保存,勿冰凍。

試劑盒組份

1. 結(jié)合緩沖液4x (Binding Buffer 4x)

體積：20 Tests: 4ml（4 倍濃縮液）

50 Tests: 10ml（4 倍濃縮液）

100 Tests: 20ml（4 倍濃縮液）

稀釋后溶液中各組分濃度：10mM Hepes/NaOH, pH 7.4, 140mM NaCl, 2.5mM CaCl2

2. 碘化丙錠溶液（Propidium Iodide, PI）

體積： 20 Tests: 0.2ml

50 Tests: 0.5ml

100 Tests: 1.0ml

濃度： 20ug/ml

3. 重組人Annexin V/FITC, (rh Annexin V/FITC)

來(lái)源：大腸桿菌（E.coli）

分子量：35.8 KDa

樣品量：20 Tests: 0.1ml，可用于20 次實(shí)驗(yàn)

50 Tests: 0.25ml，可用于50 次實(shí)驗(yàn)

100 Tests: 0.5ml，可用于100 次實(shí)驗(yàn)

保存方法：于50mM Tris, 100mM NaCl, 1%BSA, 0.02%NaN3,pH7.4 溶液中保存

純度：SDS-PAGE 及反相HPLC 表明純度大于98%

生物活性：Annexin V 可結(jié)合于磷酯酰絲氨酸并表現(xiàn)出抗磷酯酶活性

細(xì)胞凋亡流式檢測(cè)應(yīng)用

標(biāo)記的Annexin V 可結(jié)合流式細(xì)胞儀用于檢測(cè)細(xì)胞外膜上的磷酯酰絲氨酸，操作流程如下：

1. 用去離子水按1:4 稀釋結(jié)合緩沖液（4ml 結(jié)合緩沖液+12ml 去離子水）；

2. 用4℃預(yù)冷的PBS 洗細(xì)胞兩次，用250ul 結(jié)合緩沖液重新懸浮細(xì)胞，調(diào)節(jié)其濃度為1×106/ml；

3. 取100ul 的細(xì)胞懸液于5ml 流式管中，加入5ul Annexin V/FITC 和10 ul 20ug/ml 的碘化丙錠溶液；

4. 混勻后于室溫避光孵育15 分鐘；

5. 在反應(yīng)管中加400 ul PBS，流式細(xì)胞儀（FACS）分析

（注：消化細(xì)胞時(shí)不能用含EDTA 的胰酶）